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OCT冰冻切片包埋剂在冰冻切片免疫组化中的应用

OCT冰冻切片包埋剂在冰冻切片免疫组化中的应用

冰冻切片需要抗原修复吗?
冰冻切片一般不需要抗原修复,石蜡切片需要抗原修复。目前进行的常规石蜡切片标本,一般均用甲醛固定。事实上经甲醛固定的部分组织细胞,免疫组化标记敏感性明显降低,其原因为:(1)在用甲醛固定过程中形成醛键而封闭了部分抗原决定簇;(2)甲醛在保存过程中会形成羧甲基,而封闭抗原决定族;(3)在用固定剂固定时,会使蛋白与蛋白之间发生交联,也可能会封闭抗原决定族。因此在染色时为取得良好的染色效果,必须对有些抗原进行预先修复。对于冰冻切片用环保固定液固定效果较好,可省抗原修复步骤。如果是用4%PFA固定还是要考虑做抗原修复的。修复抗原的方法很多,一常用的抗原修复方法有微波修复法,高压加热法,酶消化法,水煮加热法等,常用的修复液是pH6.0的0.01mol/L的柠檬酸盐缓冲液。也有人用蒸馏水修复抗原,方法如下:将脱蜡水洗过的切片放入盛有蒸馏水的容器中,置微波炉内高中火5 min煮沸,中低火维持沸腾状态10 min。自然冷却,取出切片,滴加3%的H2O2,室温孵化15 min,PBS液洗3次,每次5 min,其它按说明书染色步骤进行。

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修复有必要吗

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