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关于免疫荧光封闭内源性生物素的问题,请解答

关于免疫荧光封闭内源性生物素的问题,请解答

我做心脏荧光,一抗生物素标记的单抗,二抗是cy3-亲和素。但是阴性对照心肌全染色了,背景很好,没心肌的地方都没染成红色。
我想没加一抗,二抗都染上色了肯定是发生了结合反应,是否是心脏的内源性生物素呢?如果我准备用鸡蛋清+5%脱脂奶封闭,有几个疑问:
1.脱脂奶封闭后是否需要洗掉?
2.脱脂奶封闭是否能代替BSA封闭?我做双标其他抗体还需要用BSA封闭吗?
3.如果用BSA封闭要求不洗,但用脱脂奶封闭又需要洗,不是也洗掉了BSA吗?
附阴性对照一张(200倍 cy3-亲和素1:100稀释)

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