willfirm

一抗孵育时间一般不需要那么长，37摄氏度40min。一抗稀释度也需要多次摸索。
二抗，孵育时间，15和17min的差别不可能这么明显，看是不是操作过程的问题，比如一抗干片？上抗体之前玻片不要甩太干了。在pbs中加入0.05%tween20，用阻水笔把组织圈起来。
这张片子采图很模糊，最好重新采。

willfirm

你做的动物模型？
如果是，那就要看你的抗体选择是否正确

willfirm

30分钟，太短了。。至少六小时。