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请教心肌组织免疫组化的问题

请教心肌组织免疫组化的问题

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请教心肌组织免疫组化的问题

1、切片脱蜡至水
2、阻断内源性过氧化物酶(198毫升甲醇或水+2毫升30% H2O2)室
温20分钟。
3、pH7.2缓冲液洗三次。
4、胰蛋白酶消化37 ℃,30分钟。(或按说明书要求:放入抗原修复液内微波修复20分钟、或电炉加热30分钟、或高压锅加帽出气后3分钟,快速冷却;或不处理)
6、滴加正常血清37 ℃,30分钟。(可不用)
7、擦去多余血清,加第一种一抗37 ℃,30分钟。
8、pH7.2缓冲液洗三次。
9、滴加生物素化二抗,37 ℃,30分钟。
10、pH7.2缓冲液洗三次。
11、滴加ABC或S-P复合物,37 ℃,45分钟。
12、pH7.2缓冲液洗三次。
13、棕色DAB显色3~10分钟。
14、pH7.2缓冲液洗三次。
15、滴加正常血清37 ℃,30分钟。(可不用)
16、擦去多余血清,加第二种一抗37 ℃,30分钟。
17、pH7.2缓冲液洗三次。
18、滴加生物素化二抗,37 ℃,30分钟。
19、pH7.2缓冲液洗三次。  
20、滴加ABC或S-P复合物,37 ℃,30分钟。
21、紫蓝色DAB显色
22、水洗
23、核固红复染,脱水,透明,封固。


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                         双重染色法
1、切片脱蜡至水
2、阻断内源性过氧化物酶(198毫升甲醇或水+2毫升30% H2O2)室温20分钟。
3、pH7.2缓冲液洗三次。
4、胰蛋白酶消化37 ℃,30分钟。(或按说明书要求:放入抗原修复液内微波修复20分钟、或电炉加热30分钟、或高压锅加帽出气后3分钟,快速冷却;或不处理)
6、滴加正常血清37 ℃,30分钟。(可不用)
7、擦去多余血清,加一抗37 ℃,30分钟。
8、pH7.2缓冲液洗三次。
9、滴加生物素化二抗,37 ℃,30分钟。
10、pH7.2缓冲液洗三次。
11、滴加ABC或S-P复合物(辣根过氧化物酶),37 ℃,45分钟。
12、pH7.2缓冲液洗三次。
13、DAB(棕色)或AEC(红色)显色3~10分钟。
14、pH7.2缓冲液洗三次。
15、双标阻断液,10分钟(可不用)
16、滴加正常血清37 ℃,30分钟。(可不用)
17、擦去多余血清,加第二种一抗37 ℃,30分钟。
18、pH7.2缓冲液洗三次。
19、滴加生物素化二抗,37 ℃,30分钟。
20、pH7.2缓冲液洗三次。   
21、滴加碱性磷酸酶复合物,37 ℃,30分钟。
22、pH7.2缓冲液洗三次。
23、BCIP/NBT显色(蓝色)
24、水洗
25、甲基绿复染,脱水,透明,封固。
  如果选择辣根过氧化物酶可选择DAB(棕色)显色,在第21步用辣根过氧化物酶复合物,第23步用AEC(红色)显色,但要注意的是AEC不能长期保存。如选择另一个为碱性磷酸酶可选用BCI/NBT、AP-Red、AP-Orange,用BCI/NBT显色最好。


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