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烤片的温度和时间对抗原影响

烤片的温度和时间对抗原影响

  免疫组织化学染色的关键是抗原的保存,在处理切片过程中的每一个环节都可能造成抗原的丢失或减弱。为此,我们对烤片过程中可能影响抗原强弱的温度和时间进行测试,以确定最佳的烤片时间和温度。
一、 材料和方法:
  将白片分别放置在:55℃温箱中4小时,8小时,16小时;60℃温箱中4小时,8小时,16小时;65℃温箱中4小时,8小时,16小时;然后用几种不同的抗体进行免疫组织化学染色。
二、结果:

阳性细胞数 强 度
55℃ 4小时 80% +++
55℃ 8小时 80% +++
55℃ 16小时 80% +++
60℃ 4小时 80% +++
60℃ 8小时 80% +++
65℃ 4小时 70~75% ++
65℃ 4小时 80% +++
65℃ 8小时 70~75% +++~++
65℃ 16小时  70%  ++
  比较各种不同条件下染色的结果,我们发现烤片温度和时间对免疫组织化学染色都有不同程度的影响。当在55℃时,烤片时间对免疫组织化学染色影响并不十分明显,用肉眼一般不容易区别;而在60℃时,时间在16小时(相当于切片烤过夜),强度有明显差异,特别是在65℃,区别更加明显,阳性细胞数减少,强度减弱。所以,我们认为免疫组织化学染色的烤片时间应定在55℃温度下4-6小时,只有这样,才不会因为烤片温度或时间不够引起染色过程中脱片,又不会使抗原丢失或减弱,才能保证免疫组织化学染色结果的可靠性。

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