返回首页 | 病理技术专题 | 病理资讯 | 病理图库 | 病理技术精英 | 同行交流 | 技术会诊 | 点滴经验 | 常规切片 | 特殊染色 | 分子免疫 | 细胞园地 | 电镜技术 | 收藏本站
发新话题
打印

免疫组化染色问题,谢谢您!我们这里40度的高温,可是我试验失败了

免疫组化染色问题,谢谢您!我们这里40度的高温,可是我试验失败了

我做了试验才回来,谢谢大家的指点!我发现你们都生活很规律哦,没有人熬夜,所以一早上这么多的回言,我很感激!
今天发现,阴性对照片很不错(反蓝),阳性组织很差,几乎全是一片棕色,当然预期该出现棕色的部位就深一些,颗粒状也比较明显,就是背景颜色太深了!我自己分析有几个原因,看看各位老师意见如何?
1:该大鼠肝脏是我的同学作的动物部分试验,我做检测部似乎他配的甲醛配方不对,稀了,我听他说后就指出纠正,但是已经固定3天了.
2,肝组织内的细胞很多空泡状改变,没有层次感,模模糊糊的一大片,感到标本很不好,会不会抗原扩散?
3,如果说是非特异性背景着色,以下原因:
1)我冲洗干净了,可以肯定
2)试验中切片没有干燥,保持了湿润
3)过氧化氢孵育了15分钟,
4)血清蛋白封闭也有10-20分钟(后来我做的是20分钟
5)组织抗原弥散?和固定液有关?
光镜下组织很模糊,去病理科作包埋的时候我就发现有一些组织是暗红色的,而正常的应该是黄色,对吗?
究竟问题是什么?我真的很迷茫,这种情况下非常苦恼,反看第一次记录(我做了4次了)那是用0.1%盐酸分化的,倒也蓝一些,后来换用了0.%盐酸酒精,反而不行了
最后请问老师们,分化的作用是什么?
我的邮箱:suolala@sohu.com,谢谢各位不吝指教!要是能电话请教就好了!
3)

TOP

免疫组化染色问题,谢谢您!我们这里40度的高温,可是我试验失败了

((究竟问题是什么?我真的很迷茫,这种情况下非常苦恼,反看第一次记录(我做了4次了)那是用0.1%盐酸分化的,倒也蓝一些,后来换用了0.%盐酸酒精,反而不行))      谢谢老师,从这一句话,以及您所说的分化的概念,我想我没有必要分化,这就是为什么第一次用0.1%盐酸分化时还有一点蓝色,而现在是一片黄。
上次我的实验大鼠固定了3个月才做的包埋,用的是10%甲醛,但是效果不错。那是在资深老师指导下做的,现在是单腔匹马自己做。
听了您的意见,我感到很有收益。。现在我又想去做实验了,把分化这一步去掉!
还有疑问:
1。颜色太皇和什么有关?是不是DAB染色太深?我在镜下观察边的变皇才去洗的,是不是有一点棕色就洗?
2。肝细胞很多空泡状改变是什么原因?是肝纤维化的肝脏呢
谢谢

TOP

免疫组化染色问题,谢谢您!我们这里40度的高温,可是我试验失败了

DAB是对的,我反复看了很多遍说明书了!850微升水,DAB各一滴,淡淡的棕色
降低一抗的化,想要的着色就会很浅了
丁老师,我盼您的回答很久了,谢谢

TOP

免疫组化染色问题,谢谢您!我们这里40度的高温,可是我试验失败了

今天按照丁老师说的作了一次,我没有分化,结果蓝色很美,谢谢

TOP

免疫组化染色问题,谢谢您!我们这里40度的高温,可是我试验失败了

还有阿,丁老师,苏木素在细胞浆是什么样色?如果是棕色的化,没有分化是不是棕色一些?

TOP

发新话题