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求助!我切冰冻切片时的几个问题。

求助!我切冰冻切片时的几个问题。

本人初做冰冻切片,因课题要做激光显微捕获切割Laser capture microdissection,在做冰冻切片时如到了以下问题,希望同行帮忙。
1.我用mayer's液染色后,1%的盐酸酒精分化后,立即拿到镜下看,效果挺好,可是当我用梯度酒精和二甲苯脱水后,拿到镜下再看时,明显地看到由蓝变黑,这是什么原因呢?我没有用伊红。是不是苏木素的染色时间长了?
2.当我加上伊红后,红色几乎把蓝色掩盖了?伊红染完,是否得用自来水冲?我用的是酒精溶性的伊红。
3.镜下组织的结构不清,乱糟糟的,就是横一道竖一道,(唉,新手,还没发过2片贴子,不让上传图片。一定争取尽快达到标准。)是不是与标本的保存有关?是不是产生冰晶了?我从手术室切下的胃癌取下标本后,直接放入-80度冰箱保存。
我的染色步骤:
100%酒精 15秒
95%酒精 15秒
70%酒精 15秒
去离子水 15秒
mayer's液 30秒
自来水   30秒左右
1%的盐酸酒精 20秒
自来水   30秒左右
70%酒精 15秒
伊红    蘸一下即拿出
自来水   20秒左右
70%酒精 15秒
95%酒精 30秒
100%酒精 1分
二甲苯   2分

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