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如何去除冰冻切片中的空泡

如何去除冰冻切片中的空泡

本人目前正用冰冻切片作免疫组化,制作切片过程如下:4%多聚甲醛灌注,取大鼠眼球,去除眼前节,继续在4度用4%多聚甲醛固定过夜,流水冲洗数小时,入10%蔗糖4度1小时,入30%蔗糖过夜,OCT包埋,置于零下20度保存,恒冷切片机切片,厚10-20微米。但切片中出现大量空泡,简直惨不忍睹,本人多次实验,无论灌注与否、保存时间长短、是否丙酮固定切片、是否封片前酒精脱水,空泡仍决不消失,请教坛主与众高手可有良方?万望不吝赐教!
三叩首!

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