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肝脏组织病变

肝脏组织病变

由于工作需要需开展铜染色,不知道有没有谁做过大家一起交流交流谢谢!
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铜染色参考资料

Timm’s 铜染色法
固定:福尔马林固定或新鲜组织
技术方法:石蜡切片或冰冻切片
试剂:
液体A :5%硝酸银水溶液
液体B:对苯二酚2.0g, 柠檬酸5.0g, 蒸馏水100ml ,液体可以贮存在4℃暗处一个月。
步骤:
1.石蜡切片脱蜡至水
2.0.5%硫化铵5min
3.充分水洗
4.用0.1N盐酸2-3min祛除铁和硫化锌液(15%三氯醋酸也可以使用)
5.水洗
6.切片置新鲜1份A液和5份B液过滤后使用,将硫化铜转化为硫化银3min就可以完成。
7.水洗
8.脱水,透明,封固
结果:铜沉积物被染成黑色
Comments:
The following control procedures should be employed with contguous sections. (1)Omit step 6.
(2)Treat With 0.5% potassium cyanium cyanide before developing to remove copper sulfide.
(3)Stain with Perl’s method for iron.


铜染色(Copper stain)
原理:铜若丹明法比红氨酸法更敏感,然而,若丹明法被证实是蛋白与铜相结合而不是与铜本身结合。因此,尽管我们认为此法具有更高的敏感性,但是有可能因其特异性低于若丹明法从而得到假阳性结果。
注意:在以下步骤中这些化学品对健康有害:若丹明害处更多的信息可以参考安全数据表。
1.若丹明饱和储存液
若丹明(D# 90)*0.2g
纯酒精100ml
注释:确保容器底部出现结晶直到液体饱和到血红色。
*目录中列出的若丹明“(P-Dimethylaminobenzalrhodanine)”或“5[p(Dimethylamino)benzylidene]rhodanine”可以互相代替。
2.若丹明工作液
饱和若丹明储存液1.5ml
蒸馏水50ml
注释:测量并混合前应摇荡储存液。加到玻片之前也要摇荡工作液。使用后丢弃。
3.Gill’s 苏木精(见H&E染色步骤)
对照:知道肝和脾有大量的铜
步骤:
1.切片脱蜡至水
2.切片在若丹明工作液立式染色缸内37℃过夜或56℃2小时
3.蒸馏水充分水洗
4.Gill’s苏木精染核1min
5.自来水返蓝,不能用氨水返蓝(NH40H)
6.充分蒸馏水洗
7.脱水,透明,永久封固剂封固
结果: 铜颗粒亮红或红-黄色,细胞核淡蓝色。
组织中铜浓度低,染色后盖上盖玻片颜色会稍微褪色.
若丹明铜微波步骤
若丹明工作液
若丹明贮存液 5ml
蒸馏水45ml
1.切片脱蜡至水
2.将切片放入50ml若丹明工作液,把探针放入液中,调TEMP/KOOK/HOLD微波炉功率到4水平的135 然后按开始
3.当温度达到了搅拌液体10min
4.充分蒸馏水洗
5.切片用Harris’s苏木精染1min
6.充分水洗
7.自来水冲洗返蓝
8.蒸馏水洗
9.脱水,透明,封固
结果:铜颗粒亮红或红-黄色,细胞核淡蓝色。

[ 本帖最后由 ylzhao 于 2007-7-31 09:29 编辑 ]

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引用:
原帖由 ylzhao 于 2007-7-31 09:23 发表
Timm’s 铜染色法
固定:福尔马林固定或新鲜组织
技术方法:石蜡切片或冰冻切片
试剂:
液体A :5%硝酸银水溶液
液体B:对苯二酚2.0g, 柠檬酸5.0g, 蒸馏水100ml ,液体可以贮存在4℃暗处一个月。
步骤:
1. ...
请问老师,哪里能够买到若丹明染液,或者是红氨酸染液!
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找一家代理公司买个试剂盒就行了.
http://www.idlabs.com/product/datasheets/BP3004.pdf

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