nwsuafwxp

[size=1]我用4％的多聚甲醛灌注后快速取脑，我想一个月后集中做冰冻切片切片，做免疫组化，应该怎样处理？怎样保存？我有下面2个方案，不知哪个可行？
（1）取脑后，在4％的多聚甲醛中存放1个月，然后30％蔗糖脱水，快速冷冻，做免疫组化。
（2）取脑后，在4％的多聚甲醛中后固定过夜，30％蔗糖脱水，液氮冷冻保存1个月，冷冻切片，做免疫组化。
另外：后固定时间一般多长？30％蔗糖是用什么来配？PBS、4％的多聚甲醛还是蒸馏水？

非常感谢！

shanghainese

新鲜为佳。
现做现用。

nwsuafwxp

我是没有办法，得借别人的切片机，所以才集中到一起了，有没有更好一点的建议啊？

蓝斑

个人认为：

1）一般不可取，多聚甲醛固定过久对一抗识别不利。

2）没用过液氮保存。倒是看到很多直接在蔗糖溶液中保存的，但看到的蔗糖保存溶液浓度ms是15或者20，记不清了，你自己查查吧。

一般后固定过夜即可，4 hrs、6 hrs也没什么问题，应该跟抗原的性质有关，可参考抗体说明书。一般不超过24 hrs。

蔗糖用PBS配制。

Pulidia

印象里，蔗糖溶液是用来脱水用的，不是保存作用的吧？一般都是说把组织放入蔗糖液再放到4度冰箱里等待组织沉底后，就表示脱水彻底了。可以只用一个浓度的蔗糖溶液进行脱水，也可以配制几个梯度的蔗糖溶液进行梯度脱水。