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培养的细胞如何做免疫组化

做细胞培养的组化有两种情况:
一是悬浮细胞培养后如果想做免疫组化,就要把细胞甩在载玻片上,(专门有这种甩片用的离心机)晾干之后固定,其中固定液可以用PFA,或者丙酮,固定在室温或者4度都可以,10~15分钟。之后就可以按照常规组化染色的程序进行下面的实验了。需要注意的是:甩片之前要用PBS把细胞洗两次,然后记一下细胞数,可以试几个细胞浓度,在镜下观察,以单层平铺细胞为宜。找到合适的浓度后再制备实验用的甩片样品。
二是贴壁细胞需要做免疫组化时,可以在培养皿里放入盖玻片,让细胞长在上面后,在取出来进行实验。需要注意的是:取出培养好细胞的盖玻片后,PBS洗两次后,室温晾干用PFA或丙酮室温或4度固定都可以,10~15分钟。之后可按组化常规方法进行。封片时将有细胞的面向下盖在载玻片上即可。
另外,用丙酮固定细胞的同时即对细胞膜进行了打孔的步骤,如果用PFA进行固定,则需要再使用打孔剂打孔(细胞内表达)。使用过氧化氢去除内源性过氧化物酶时,细胞要比石蜡切片的组织反应强烈,偶尔会掉片。
认真做事,踏实做人!fighting!!

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细胞片捞出后常规脱水,二甲苯透明,树胶封片,我觉得还是湿封好吧!
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