乳腺癌针吸细胞涂片检测性激素受体
乳腺癌针吸细胞涂片检测性激素受体
余小蒙 张长淮 黄受方 (北京友谊医院病理科 100050)
【摘要】 目的 探讨乳腺癌针吸细胞(FNAC) 检测性激素受体(SHRs) 技术及其意义。方法 应用SHRs 的单克隆
抗体对83 例乳腺癌病人的FNAC 涂片进行免疫组化法检测,并与组织切片检测结果对照。结果 (1) 技术条件优
选实验显示冷丙酮固定的涂片,经过低温保存、1 %过氧化氢甲醇溶液处理内源性过氧化物酶;使用1∶1 稀释度的
一抗工作液,经过适当的孵育过程后,可以获得好的标记效果。(2) 其中59 例FNAC 涂片与其石蜡切片ER、PR 检
测的总符合率均为94. 9 % ,其余24 例FNAC 涂片与其冰冻切片ER、PR 检测的总符合率均为95. 8 %。结论 优
良的针吸操作技术,适宜的涂片处理及免疫组化标记方法是乳腺癌FNAC 涂片SHRs 检测成功的重要条件。乳腺
癌FNAC 涂片SHRs 检测结果与组织切片同样可靠。这种检测方法简便易行,在为乳腺癌病人选择治疗方案或为
不适合手术的病人选择内分泌治疗时具有重要意义。
【关键词】 乳腺肿瘤 细针吸取细胞学(FNAC) 受体 免疫组织化学
Assay of ** Hormone Receptors on Fine Needle Aspiration Cytological Smears of Breast Carcinomas
Yu Xiao2meng , Zhang Chang2huai , Huang Shou2fang
Department of Pathology , Beijing Friendship Hospital , Beijing 100050
【Abstract】 Objective To explore the technique of assaying ** hormone receptors (SHRs) on fine needle aspiration cy2
tological (FNAC) smears of breast carcinomas and its significance.Methods 83 cases of FNAC smears of breast carcino2
mas were assayed with monoclonal antibodies against SHRs by immunohistochemical stains and compared with the results
of their histological sections of surgical specimens. Results (1) The test showed that the smears fixed with cold acetone ,
preserved in low temperature , experienced decrease of endogenous peroxidase with 1 % hydrogen peroxide methanol solu2
tion and incubated in suitable condition with 1 :1 dilution of primary antibody labelling solution were able to get good la2
belling results. (2) The overall concordance rate of estrogen receptor ( ER) and progesterone receptor (PR) was 94. 9 % in
59 cases of FNAC smears compared with their paraffin sections , and that in another 24 cases was 95. 8 % when their
FNAC smears were compared with their frozen sections.Conclusion Excellent techniques of aspiration , suitable prepara2
tion of smears and immunohistochemical labelling method of smears are important procedures to obtain a successful assay of
SHRs on FNAC smears of breast carcinomas , the result of which is as reliable as that obtained from their histological sec2
tions. The method is ** , convenient , and particularly important in a patient not suitable to receive surgical treatment
but select endocrine therapy.
【Key words】 Breast neoplasm Fine needle aspiration cytology Receptors Immunohistochemistry
目前应用性激素受体( ** hormone receptors ,
SHRs) 的单克隆抗体免疫组化法对乳腺癌手术标本
组织切片检测的工作已在国内广泛开展,但对未手
术的乳腺癌病人针吸细胞涂片的检测却很少开展。
为此,近几年来我们对一组接受针吸细胞学检查
(FNAC) 的乳腺癌病人的涂片进行了这项检测的探
索,并获得了成功,总结分析如下。
1 材料与方法
1. 1 材料
83 例乳腺癌病人(包括原发癌79 例、淋巴结转移癌3
例、头皮转移癌1 例) 的针吸细胞涂片收集自1994 年11 月
至1996 年1 月北京友谊医院病理科FNAC 门诊。全部涂片
均做SHRs 检测,并与其手术标本组织切片(其中59 例为石
蜡切片、24 例为冰冻切片) 的检测结果做对照。
1. 2 方法
1. 2. 1 使用“友谊式细针穿刺器”(针管容量10ml 配外径
0. 8mm注射针头) ,局部消毒后经皮刺入乳腺癌灶内,然后使
持有负压的穿刺针在癌灶内进退6～10 次,见有足量吸取物
进入针头柄内后将针退出皮肤。涂片4～8 张,选取含血液
《诊断病理学杂志》1998 年9 月第5 卷第3 期·129 ·
少质量好的涂片2～4 张供免疫组化染色SHRs 检测,其余
涂片供HE 染色做细胞学诊断。
1. 2. 2 细胞涂片免疫组化标记条件优选实验 实验证实照
搬组织切片标记方法于细胞涂片不能获得满意结果。为此,
我们选择10 例经组织切片SHRs 检测阳性的乳腺癌新鲜手
术标本刮取材料涂片,设置不同条件实验,依据阳性细胞百
分率比较标记效果,优选出其中最适合的条件。(1) 固定方
式:将涂片分别用冷丙酮( - 10 ℃) 、冷甲醇( - 10 ℃) 、95 %乙
醇、3. 7 %甲醛PBS 固定液固定15min 后,进行标记结果比
较。(2) 涂片保存:将固定后的涂片分别进行立刻标记;或装
木盒内,或用蔗糖—甘油保存液封固,再放入- 20 ℃低温冰
箱内分别保存1d、5d、10d、15d、20d、25d、30d 后进行标记结
果比较。(3) 内源性过氧化物酶处理:用3 %过氧化氢溶液
或不同浓度(1 %、2 %、3 %) 过氧化氢甲醇溶液处理内源性过
氧化物酶,进行标记结果比较。(4) 一抗稀释度:将ER、PR
工作液与其不同稀释浓度(1∶1 、1∶2 、1∶3 、1∶4) 的稀释液分别
孵育涂片,进行标记结果比较。(5) 一抗孵育温度和时间:将
加入一抗后的涂片分别置于20 ℃～25 ℃度室温中或4 ℃～
6 ℃冰箱内孵育30min、1h、2h、4h、8h、16h、24h ,进行标记结
果比较。
1. 2. 3 SHRs 的单克隆抗体免疫组化染色及对照完成免疫
组化染色 试剂盒由美国ZYMED 公司提供。包括一抗:鼠
抗人ER21D5 和PgR21A6 ;桥抗:生物素标记的羊抗鼠IgG;
SP :辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素。阳性对照用已知
ER 和PR 表达阳性的乳腺癌组织石蜡切片。阴性对照用
ER 和PR 表达阴性的横纹肌组织石蜡切片。空白对照用
TBS 缓冲液代替一抗在已知ER 和PR 表达阳性的乳腺癌组
织石蜡切片上完成。
1. 2. 4 SHRs 阳性细胞表达及检测结果的判断 (1) 在光镜
下细胞涂片与组织切片内SHRs 的单克隆抗体阳性表达细
胞的特征完全相同,即特异性棕**颗粒状着色位于细胞核
内而不存在于胞浆中(图1 ,2)〔1〕,阴性表达细胞的核着灰蓝
色。(2) 检测结果判断:FNAC 涂片连续计数200 个癌细胞,
组织切片连续计数500 个癌细胞。遇重叠而未平展开的癌
细胞团(见于涂片内) 、正常导管上皮细胞、间质细胞、组织细
胞、各种血细胞及坏死细胞不应计算在内。根据阳性细胞百
分比判断检测结果。即:阳性细胞< 15 %为检测结果阴性,
≥15 %为检测结果阳性〔2〕。检测结果由两人判定。
2 结果
2. 1 细胞涂片免疫组化标记条件
2. 1. 1 固定方式显示 冷丙酮固定标记********;
95 %乙醇固定标记效果较好;甲醇尚可;甲醛最差。
2. 1. 2 涂片保存方式显示 用木盒装的涂片和用
蔗糖—甘油封固的涂片在- 20 ℃低温冰箱分别可保
存5d 和25d 标记效果无变化。超过上述期限标记
效果将会减弱。
2. 1. 3 内源性过氧化物酶处理显示 用3 %过氧
化氢溶液处理5 分钟后的涂片易造成细胞脱落。采
用1 %过氧化氢甲醇溶液处理15 分钟不会造成细
胞脱落并且能够很好地降低内源性过氧化物酶而引
起的非特异性着色。
2. 1. 4 一抗稀释度显示 将工作液1∶1 稀释后,其
标记效果与未稀释的工作液完全相同。低于此稀释
度,标记效果将会减弱。
2. 1. 5 一抗孵育显示 涂片在20 ℃～25 ℃室温下
孵育2h 或在4 ℃～6 ℃冰箱内孵育8h ,可达到****
标记效果。
2. 2 FNAC 涂片与组织切片SHRs 检测结果对照
2. 2. 1 本组59 例FNAC 涂片与其手术标本石蜡
切片检测结果对照见表1 。
表1 59例乳腺癌FNAC 涂片与石蜡切片检测结果对照
石蜡切片例数
FNAC 涂片例数
阴性阳性
符合率( %)
ER
阴性16 14 2 87. 5
阳性43 1 42 97. 7
合 计59 15 44 94. 9 (总符合率)
PR
阴性24 22 2 91. 7
阳性35 1 34 97. 1
合 计59 23 36 94. 9 (总符合率)
注: X2 检验P > 0. 05
2. 2. 2 本组24 例FNAC 涂片与其手术标本
冰冻切片SHRs 检测结果对照见表2 。
表2 24例乳腺癌FNAC 与冰冻切片SHRs 检测结果对照
冰冻切片例数
FNAC 涂片例数
阴性阳性
符合率( %)
ER
阴性5 5 0 100
阳性19 1 18 94. 7
合 计24 6 18 95. 8 (总符合率)
PR
阴性8 8 0 100
阳性16 1 15 93. 8
合 计24 9 15 95. 8 (总符合率)
注: X2 检验P > 0. 05
3 讨论
3. 1 FNAC 涂片SHRs 检测成功的条件
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