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各位专家、老师帮忙瞅一眼,谢谢您嘞!!

各位专家、老师帮忙瞅一眼,谢谢您嘞!!

各位老师:
      小学生科研有一块是做冰冻免疫组化的,做的不成功!最最重要的是,我不知道自己做的有没有阳性结果!详见附图(鸡的胸腺组织)
如果有老师懂这一块的话,希望能得到您的指点!

[ 本帖最后由 daniel 于 2009-7-6 16:41 编辑 ]
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补充!

如果不是阳性结果的话,我能听到您的建议吗?
下面是一些详细的资料
各位老师:
      小学生科研有一块是做冰冻免疫组化的,做的不成功!最最重要的是,我不知道自己做的有没有阳性结果!如果有老师懂这一块的话,希望能得到您的指点!
      实验动物是鸡,目的蛋白是T淋巴细胞细胞膜上的一类跨膜转载糖蛋白——CD4。
      我的实验材料:新鲜组织,液氮速冻(既有直接扔里面的,也有用锡纸做纸盒漂上面的),—80°保存至少72小时,然后切片。所用切片机是浙江益迪产的YD-1900冰冻切片机。一抗购自美国SBA鼠抗鸡CD4单抗,二抗是购自中山金桥的SP9002二抗试剂盒。
      我的试验方法:切片5微米,然后室温放置30min以上,—20°丙酮固定20min,然后再室温放置30min以上,—20°保存。然后常规免疫组化:pbs 3×5min,3%双氧水20min,pbs 3×5min,二抗的A液(也就是山羊血清封闭)37°×30min,甩去,加一抗(pbs,1:100稀释)4°过夜,pbs 3×5min,j加B液(羊抗鼠的二抗),pbs 3×5min,加C液(也就是辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素),pbs 3×5min,DAB显色

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再附一张图

这是40倍镜下的图片

[ 本帖最后由 daniel 于 2009-7-6 16:43 编辑 ]
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在线等高手……

[ 本帖最后由 daniel 于 2009-7-6 16:42 编辑 ]

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为何不用苏木素做细胞核复染?
要用苏木素做细胞核复染,才能看清楚组织细胞的结构。

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为何不用苏木素做细胞核复染?
要用苏木素做细胞核复染,才能看清楚组织细胞的结构。

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谢谢老师的建议

原来我们实验室做的小鼠CD4,CD8不复染也出结果了,但我这个怎么就不出呢!
这是我师姐做的小鼠胸腺CD4的照片

[ 本帖最后由 daniel 于 2009-7-9 14:17 编辑 ]
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我正在做复染的切片,昨天做了一张,苏木素染得不成功,今天再试一张,预计明天贴出来

谢谢老师们提的宝贵意见

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另外,还要有ISOTYPE CONTROL。
否则没法看。

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复染照片,各位老师帮忙鉴定

这是100倍镜检CD8,组织为胸腺组织
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