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求助:甲基萘醌四唑氮蓝染色法,谢谢。

你是不是染肌肉组织? 我知道有这种四唑蓝法染色,别的方法就不清楚了.

NADH-TRNADH-tetrazolium reductase)染色
1.
下列液体内,37孵育30min
0.05mol/L Tris盐酸缓冲液(pH7.430ml
NBTnitro blue tetrazolium30mg


β-NADHβ-nicotinamide-adenine dinucleotide24mg


pH
值调到7.4
2.
依次30%-60%-90%-60%-30%丙酮分化
3.
水洗
4.
甘油明胶封片。
这种液体每次都需要从新配制
0.05mol/L Tris-HCl缓冲液:
Tris(hydroxymethyl) aminomethane 6.06g,浓盐酸3.43ml,蒸馏水1000ml配制。pH7.4
甘油明胶:明胶7g,加蒸馏水40ml,室温放置2小时。加甘油50ml,苯酚0.5g70-80缓慢搅拌15min。纱布过滤保存。使用时60加热直到呈液状,然后封片。
改良还原型辅酶Ⅰ还原酶染色法
材料与方法

取二头肌,四头肌样品经异戊烷予冷器冷冻在-160℃液氮后恒温冷冻切片机切片10微米。
染色液配制

还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)- Sigma N8129
8mg


硝基四唑氮蓝Nitro blue tetrazolium - Sigma N6876),
10mg


0.2 mol TRIS HCl缓冲液pH7.4 10ml


二甲亚砜DMSO 0.5-1.0ml
以上染液临用前新鲜配制,配制方法将NADH,NBT,TRIS HCI混合后加入DMSO然后用玻璃棒搅拌2-3分钟,过滤后使用。
染色步骤
1 将冰冻切片放入染液中盖好染色缸的盖子置37℃-55℃水浴12-25分钟。
2 流水冲洗1分钟。
3 蒸馏水洗3次。
4 甘油-明胶封片。
结果 基质网和线立体呈蓝紫色,肌纤维Ⅰ型比Ⅱ型稍微黑一些,血管壁同时也被染色。
肌纤维类型
颜色
Ⅰ型

Ⅱ型



[ 本帖最后由 ylzhao 于 2009-8-30 22:47 编辑 ]
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